Метод измерения афлатоксина кукурузы
Афлатоксин, сокращенный как AFT на английском языке, представляет собой соединение, состоящее из дифуранилового кольца и кумарина (оксанафтохинона).,с молекулярной массой 312-346 и температурой плавления 200-300 °C. Имеет стабильные и высокотемпературные свойства и может производить флуоресценцию при длинноволновом ультрафиолетовом свете.Он разделен на B1, B2, G1, G2, M1, M2, P1, R1, GM и токсичные спирты в соответствии с различными цветами флуоресценции, значениями RF и структурами.
АФТ нерастворим в воде, этане, эфире и нефтяном эфире, но легко растворим в органических растворителях, таких как метанол, этанол, хлороформ, ацетонитрил и диметилформамид.АФТ может слегка разлагаться в кислотных растворителях с pH 1-3, быстро разлагаются и разрушаются в растворах с рН 9-10, быстро разлагаются при воздействии щелочей и разлагаются почти нетоксичными солями в щелочных растворах с рН 9-10.Он может быть уменьшен в кислотных условиях..
Цель эксперимента
Афлатоксин относится к некоторым высокотоксичным канцерогенным веществам, вырабатываемым грибами.часто встречающиеся симптомы нарушения функции печени, такие как лихорадкаДлительное воздействие низких доз (20 микрограммов на кг массы тела) может значительно увеличить риск развития рака печени, рака желудка и других заболеваний.Поскольку он широко распространен в сельскохозяйственных культурах и пищевых продуктах и представляет большой вред для людей и животных, установление быстрых и точных методов обнаружения имеет большое значение для обеспечения безопасности пищевых продуктов и общественного здравоохранения.
Целью данного эксперимента является использование принципа твердофазного энзимосвязанного иммуносорбентного анализа (ELISA), а именно энзимосвязанного иммуносорбентного анализа (ELISA),для ограничения и количественного определения содержания афлатоксина В1 в образцах, обеспечивающий научную основу для оценки риска загрязнения пищевых продуктов.
Экспериментальный аппарат
1 анализатор микотоксинов ST-2000A
2 Кукуруза, гомогенизатор, устройство для сушки азота, осциллятор, центрифуга, пипетка с градуированием, баланс (чувствительность 0,01 г), микропипетка, реагент метанола, n-гексана, хлороформа или дихлорметана
Экспериментальная процедура
1 Проверьте оборудование, используемое в эксперименте, чтобы убедиться, что оно чистое, сухое и свободно от загрязнений
2 Смешать метанол и деионизированную воду в соотношении 7:3 для приготовления раствора экстракции пробы
3 Возьмите 2 г измельченного кукурузного образца и поместите его в 50 мл центрифугу. Добавьте 5 мл раствора экстракции образца и встряхните в течение 5 минут при комнатной температуре 4000 оборотов в минуту в течение 10 минут.Принимать 0Добавьте 0,5 мл деионизированной воды.
4 Из холодильной среды температуры 4 °C извлечь необходимые реагенты, дать им сбалансироваться при комнатной температуре в течение 30 минут и хорошо встряхнуть.и развести в 20 раз концентрированный раствор для стирки с деионизированной водой, чтобы получить рабочий раствор для стирки.
5 Нумерация соответствующих микропор образца и стандарта в последовательности, 2 параллельных скважины для каждого образца и стандарта, и запись позиции стандартных скважин и скважин образца.Добавить 50 μl/скважину стандартного или образца в соответствующие микропорыЗатем добавить 50 мк л/ скважину ферментального маркера, а затем добавить 50 мк л/ скважину рабочего раствора антитела.Реагировать при 25 °C в течение 30 минут.
6 Удалите пленку, отхлестните жидкость внутри отверстия и тщательно промывайте 5 раз 250 мкл рабочего моющего средства на отверстие, с интервалом 30 секунд между каждым промыванием.Используйте абсорбирующую бумагу для сушки
Добавьте в каждую скважину раствор субстрата А (50 мк л), затем раствор субстрата В (50 мк л).
Добавьте 50 мкл окончательного раствора в каждую скважину, мягко встряхните и хорошо перемешайте, чтобы закончить реакцию.
9 Измерять значение абсорбции каждой скважины при 450 нм с помощью афлатоксиноанализатора (рекомендуется двойная длина волны 450/630 нм).Измерение должно быть завершено в течение 10 минут после окончания реакции.
10 Прибор завершает измерение и автоматически предоставляет результат
Экспериментальные результаты
После тестирования содержание афлатоксинов в образце составляет примерно 0,19 уг/кг, что соответствует стандарту GB 2761-2017 "Национальный стандарт безопасности пищевых продуктов для ограничения содержания грибковых токсинов в пищевых продуктах".